REVIEW

近年來，SARS-CoV-2病毒全球大流行，給病毒診斷帶來了巨大的挑戰(zhàn)。以往的核酸檢測方法因復(fù)雜的樣品處理和昂貴的儀器設(shè)備，且檢測時間過長（約2小時），降低病毒檢測的速度。因此，市場迫切需要核酸分子檢測從標(biāo)準(zhǔn)的核酸檢測實驗室向快速POCT轉(zhuǎn)移。安普未來的MIRA技術(shù)憑借著快速、簡便、靈敏、便攜的優(yōu)勢，為推動該項需求的實現(xiàn)做出顯著貢獻。

將核酸擴增與CRISPR結(jié)合，是當(dāng)下一種新型核酸檢測方法。已有多位科研老師將MIRA技術(shù)與CRISPR技術(shù)做結(jié)合，在檢測SARS-CoV-2病毒時，顯示出優(yōu)異的靈敏度、特異性，尤其在檢測的高效和便捷方面，顯著優(yōu)于其他技術(shù)，為實現(xiàn)快速POCT提供了解決方案！

MIRA技術(shù)結(jié)合

CRISPR Cas12、Cas13a蛋白

武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)研究院/教育部免疫與代謝前沿科學(xué)中心的殷昊教授和張楹教授課題組，在《Nature Biomedical Engineering》期刊上發(fā)表題為“Fast and sensitive detection of SARS-CoV-2 RNA using suboptimal protospacer adjacent motifs for Cas12a”的文章，影響因子29.234。

實驗成功開發(fā)了一種基于恒溫擴增（安普未來恒溫擴增試劑）和CRISPR相結(jié)合一步法熒光檢測（SARS-CoV-2）的方法，檢測時間小于20 分鐘，靈敏度與RT-qPCR一致且特異性強。該方法快速、靈敏和便于操作。

（使用安普未來試劑來檢測SARS-CoV-2的方法流程圖）

（熒光信號在6-10 min時開始出現(xiàn)，在9-15min時逐漸達到平臺期）

實驗同步還使用了美國雅培的TwistDx恒溫擴增試劑做對比。結(jié)果顯示，安普未來的MIRA試劑和雅培的靈敏度一致，檢測限為24拷貝/反應(yīng)。但雅培與Cas12a、Cas13a的緩沖環(huán)境并不完全兼容。安普未來的MIRA試劑在保證準(zhǔn)確性、靈敏度的同時，穩(wěn)定性和兼容性更勝一籌！

（文章引用：https://www.nature.com/articles/s41551-022-00861-x）

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MIRA技術(shù)結(jié)合

CRISPR Cas13蛋白

中國人民解放軍疾病預(yù)防控制中心宋宏彬主任的課題組在《JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY》發(fā)表了題為“Highly sensitive and rapid detection of SARS-CoV-2 via a portable CRISPR-Cas13a-based lateral flow assay”的文章，影響因子20.693。

實驗采用兩步法的操作方法，研究人員針對SARS-CoV-2 N基因序列設(shè)計篩選了MIRA擴增的引物，使用安普未來試劑，參考說明書進行體系配制，在42°C條件下擴增30 min。MIRA完成擴增后結(jié)合CRISPR技術(shù)分別進行了熒光法的檢測和試紙條的檢測。

（使用安普未來試劑來檢測SARS-CoV-2的熒光或免疫層析法流程圖）

（結(jié)果顯示檢測限為0.25拷貝/μl）

實驗中，熒光和免疫層析檢測SARS-CoV-2的檢測限均為0.25拷貝/μl，即2.5拷貝/反應(yīng)，MIRA技術(shù)的靈敏度優(yōu)于市場上常規(guī)擴增試劑，得到了劉洪波老師等的高度認可。

該實驗將MIRA與CRISPR結(jié)合，提供了一個可視化檢測方法，且反應(yīng)溫度為37-42°C，控溫要求低，節(jié)省了昂貴儀器的成本，大大提高現(xiàn)場檢測的可能性。

（文章引用：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/jmv.28096）

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MIRA技術(shù)結(jié)合

CRISPR Cas12a蛋白

亞能生物湯光輝博士的課題組在《PLOS Biology》期刊上發(fā)表了題為“Rapid detection of SARS-CoV-2 with CRISPR-Cas12a.”的文章，影響因子9.593。文中介紹了一種基于CRISPR Cas12a的檢測SARS-CoV-2的方法。

實驗采用兩步法的操作方法，首先使用安普未來試劑在42?C的條件下擴增15-20分鐘，再使用CRISPR Cas12蛋白在37?C條件下反應(yīng)15-20分鐘。該實驗最快可以在35分鐘內(nèi)完成，并在紫外光成像儀或橫向流動帶下進行可視化的結(jié)果判讀。

（使用安普未來試劑來檢測SARS-CoV-2的熒光閱讀器或視覺檢測方法流程圖）

（凝膠成像系統(tǒng)檢測信號&橫向流動試紙條顯色）

該實驗的分析靈敏度為1拷貝/μL，即達到1拷貝/反應(yīng)，且可以通過肉眼觀察結(jié)果。這種準(zhǔn)確、便攜、快速的檢測方法在非專業(yè)分子實驗室環(huán)境中對檢測COVID-19方面具有巨大的市場前景及發(fā)展?jié)摿Α?/span>

（文章引用：https://journals.plos.org/plosbiology/article?id=10.1371/journal.pbio.3000978）

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MIRA技術(shù)

安普未來MIRA技術(shù)的試劑產(chǎn)品已走入不少科研單位實驗室和企業(yè)生產(chǎn)車間，在保證基礎(chǔ)的靈敏度、特異性的前提下，不受設(shè)備、場地的局限，快速高效地完成檢測，很好地解決了POCT的問題，具有更加廣闊的市場前景！

文章轉(zhuǎn)載：https://mp.weixin.qq.com/s/Ysk1B_x2ei_vVDw8ivPr7Q

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